心尖肥厚型心肌病

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每周一鼠Tnni3k基因编辑小鼠与心 [复制链接]

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赛业生物《每周一鼠》,每周五更新,为大家讲解一个小鼠模型的故事,希望对大家了解不同的小鼠模型有所帮助。今天和大家见面的是Tnni3k基因编辑小鼠。

Tnni3k基因

编码个氨基酸构成的蛋白,其蛋白分子量约为93kD。TNNI3K蛋白含有三个结构域:N端为7个锚蛋白重复序列(ANK),中间近C端为典型的丝氨酸/苏氨酸、酪氨酸激酶结构域,C末端是一富含丝氨酸的结构域。TNNI3K属于MAPKKK激酶家族,不仅可以发生自身磷酸化,而且可以将激酶通用底物髓鞘碱性蛋白磷酸化。

在胎儿6种组织、成人8种组织的NorthernBlot检测结果和76种组织的多组织点阵膜杂交实验的结果显示,TNNI3K仅在成人及胎儿的心脏中表达,而在其他组织中未见表达。因此,该基因是一个心脏特异性表达的激酶基因。不仅如此,该基因还能与心肌肌钙蛋白I、心肌肌动蛋白等一系列肌小节收缩调节蛋白发生作用。心肌细胞增强因子2C是调节TNNI3K的关键因子,另外,TNNI3K活性能被抗氧化蛋白1所抑制[1,2]。

图1.TNNI3K蛋白结构。

Tnni3k与心血管疾病

与Tnni3k相关的疾病包括扩张型心肌病、心脏肥大。与该基因相关的GO分析包括转移酶活性、磷转移酶活性和蛋白酪氨酸激酶活性[4]。

心肌肥厚分为生理性心肌肥厚和病理性心肌肥厚,二者都表现出心脏质量的增加、心肌细胞表面积增大、心肌肌小节组装增强、蛋白合成增加。生理性的心脏生长可能由于锻炼等因素形成,表现为正常的心脏结构,正常或改善的新功能。病理性的心脏生长往往发生于疾病状况下,如长期的压力超负荷(高血压,心脏瓣膜疾病)、容量超负荷(动静脉分流)、心肌梗死或与冠心病关联的缺血、遗传突变、糖尿病等。

生理性心肌肥厚具有保护心脏的功能作用,而病理性心肌肥厚最终发展为心衰。除此之外,病理、生理性肥厚的功能特征主要包括:肌小节组装的改变、心肌纤维化的分子机制改变、心脏能量代谢的改变以及生化与分子生物学特征的改变[1]。

Tnni3k基因编辑小鼠

1●Tnni3k条件性敲除小鼠

心肌细胞条件性Tnni3k纯合敲除小鼠表现出对心脏缺血/再灌注损伤的降低[5]。

研究人员使用诱导型心肌细胞特异性表达的Cre重组酶系统研究了小鼠Tnni3k基因的功能。之后,对Tnni3k条件性敲除小鼠(Tnni3k-KO)和野生型同窝小鼠进行缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)实验。24小时后,Tnni3k-KO的梗塞明显更小(图2B-C),但两组小鼠的风险区域(areasatrisk,AAR)没有明显差异(图2D)。

在I/R诱导之后,Tnni3k-KO的三种损伤标志物cTnI、心肌肌钙蛋白T和肌球蛋白轻链在血浆中的水平相较于野生型小鼠低很多。此外,在Tnni3k-KO中,磷酸化p38的含量显著降低,但磷酸化的ERK1/2、JNK和Akt的含量在两组小鼠中未发生明显改变(图2F),这表明活化的p38含量的降低对小鼠心脏具有一定的保护作用。因此,Tnni3k可以调控心肌细胞对再灌注损伤的反应[6]。

图2.敲除Tnni3k可减少I/R后梗死面积和p38MAPK激活。

(B)来自Tnni3k-KO和野生型小鼠中具有代表性的埃文斯蓝和TTC染色切片(每组n=11)。

(C)梗死面积占AAR面积的百分比。

(D)AAR面积占左心室(leftventricle,LV)面积的百分比。

(E)血浆中cTnI、血浆肌钙蛋白T(cTnT)和肌球蛋白轻链(MLC)的含量。

(F)Tnni3k-KO和野生型小鼠左心室远端的Akt、ERK1/2、JNK1/2以及p38MAPK磷酸化状态的代表性WB实验结果(每组n=6)。灰度分析结果在WB结果的右侧。

2●Tnni3k过表达转基因小鼠

研究人员首先构建了由α-MHC作为启动子的Tnni3k表达质粒,并注射到胚胎中进而构建转基因动物。值得注意的是,使用转基因方式构建的小鼠,不同的个体(或称为谱系)可能具有不同的基因型或表型。研究人员发现TG-H谱系的小鼠在3月龄(31.3%)和12月龄(43.1%)的时候表现出异常的心重/体重比变化(heartweight/bodyweight,HW/BW)。研究人员之后对这一谱系的小鼠进行了后续分析。

在3月龄时,TG-H小鼠的心脏明显大于野生型同窝小鼠(图3A)。切片结果显示转基因小鼠具有同侧心室肥大的表型,并具有腔室尺寸较小、心室壁较厚的特点(图3B)。镜下观察结果显示,在TG-H小鼠中未观察到坏死或肌细胞紊乱的现象(图3C,上图)。Masson三色染色的结果显示TG-H转基因小鼠没有间质纤维化的发生(图3C,下图)。除此之外,研究人员通过HE染色检测心肌细胞的横截面积,实验结果显示,TG-H谱系小鼠的心肌细胞明显更大,并且,其平均表面积比同窝对照小鼠大1.8倍(图3D)[6]。

图3.Tnni3k过表达转基因小鼠3月龄的心脏组织学分析。

(A)完整心脏的形态学照片。

(B)HE染色后心脏的宏观视图,结果显示TG-H小鼠同侧心室肥大。

(C)心肌细胞的组织学分析,上图是HE染色切片,下图是三色染色切片。

(D)从HE染色的组织切片中定量心肌细胞的横截面积。

小结

本篇文章介绍了Tnni3k基因,该基因是一个心脏特异性的激酶,因此其主要功能也与心脏功能有关,心脏特异性敲除该基因的小鼠在经历心脏缺血/再灌注损伤后,其损伤程度相对较低,过表达该基因的小鼠会出现心脏肥大的表型。目前已经有许多Tnni3k的抑制剂,如GSK,GSK以及GSK[8],这些抑制剂为心脏病的治疗提供了新的思路,除此之外,该基因也是一个基因治疗和基因检测的相关靶标。

参考文献:

1.王林;TNNI3K促进心肌细胞肥大、增强肌丝钙敏感度及nexilin基因调节心肌收缩性[D];北京协和医学院;年

2.戴洪甜.TNNI3K对心肌缺血性损伤后心肌细胞中SDF-1表达的影响及其机制研究[D].华中科技大学,.

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